組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

?

實(shí)驗(yàn)過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量儲(chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開，并且要充分混勻。檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。
焦棓酚紅Phospho-ALK (Tyr1586) Antibody3,5-二甲基異噁唑-羧酸

(2-吡啶基)-5,6-雙(磺基)-1,2,三二鈉鹽水合物(>98.0%(HPLC))Jak1 (6G4) Rabbit mAb溴-甲酸,97%

2-鄰羥亞芐基氨基酚(>95.0%(T))Jak1 (6G4) Rabbit mAb(R)-哌啶甲酸酯

鋅試劑NME1/NDKA (D98) AntibodyN-甲基鄰

1,2-雙(二甲膦基)烷(>95.0%(GC))Ikaros (D6N9Y) Rabbit mAb (PE Conjuga)十二烷基磺酸鈉

內(nèi)消旋-2,二巰基丁二酸(>98.0%(T))SEK1 (5C10) Rabbit mAb氟-

N-(2,6-二基氨酰甲基)亞氨基二酸(>98.0%(HPLC)(T))Nestin (10C2) Mouse mAb環(huán)丁基

N-(2,6-二基氨酰甲基)亞氨基二酸(>99.0%(HPLC)(T))Synaptotagmin-1 Antibody2-溴并噻唑

1-羥基亞基-1,1-二膦酸(約60%水溶液,約4.2mol/L)BOB-1/OBF-1 Antibody二十二碳六酸

亞甲基二膦酸(>95.0%(T))Phospho-ALK (Tyr1586) (3B4) Rabbit mAb(嗎啉基)

吡哆-L-谷氨酸二鹽[藥物研究配體]SGTA Antibody硝基茴香硫

吡哆-L-異亮氨酸鹽[藥物研究配體]ApoA1 (5F4) Mouse mAb一縮二

1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷四鹽酸鹽(>98.0%(N))UTX (D3Q1I) Rabbit mAb庚酰

己二酸雙(2-基己基)酯(>98.0%(GC))CD79A Antibody基*氧基硅烷

叔戊基酚(>98.0%(GC))CD79A Antibody2-氨基-6-并噻唑

己基酚(>98.0%(GC))Stathmin Antibody【口+奈】啶

正庚基酚(>98.0%(GC))Stathmin Antibody喹唑啉

戊基酚(>97.0%(GC))Phospho-Stathmin (Ser16) Antibody2,二甲基-5-基-1H-吡咯-羧酸

金屬硫蛋白(MT)ELISA試劑盒Proasome 20S LMP7  低分子質(zhì)量蛋白7100 ul

解整合素樣金屬蛋白酶9(ADAM9)ELISA試劑盒P-selectin/CD62p  P選擇素100 ul

解整合素樣金屬蛋白酶8(ADAM8)ELISA試劑盒L-Selectin/CD62L  L選擇素100 ul

解整合素樣金屬蛋白酶19(ADAM19)ELISA試劑盒E-Selectin/CD62E  E選擇素100 ul

睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)ELISA試劑盒Patched/PTCH   Patched/PTCH20 ul

結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)ELISA試劑盒CD63/MLA1  黑色素瘤相關(guān)抗原100 ul

結(jié)締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒CD64/IGFR1  免疫球蛋白G Fc段受體I100 ul

結(jié)蛋白(Des)ELISA試劑盒CD66a/CEACAM1  癌胚抗原相關(guān)細(xì)胞粘附分子11 Kit

窖蛋白Caveolin1(Cav-1)ELISA試劑盒PN/MMAC1(NT)  一種腫瘤抑制基因（N端）100 ul
豬布氏桿菌PCR檢測(cè)試劑盒廠家人抗甲狀腺微粒體抗體(ATMA/TMAB)ELISA試劑盒英文名稱：human Anti-Thyroid Microsome Antibody,ATMA/TMAB ELISA Kit*

人抗膠原蛋白抗體(CLA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Collagen autoantibody,CLA ELISA Kit*

人抗角蛋白抗體(AKA)ELISA試劑盒英文名稱：Human Anti-keratin antibody,AKA ELISA Kit*

人抗角蛋白絲聚集素/絲集蛋白抗體(AFA)ELISA試劑盒英文名稱：Human anti-filaggrin antibody,AFA ELISA Kit*

人抗抗體(AsAb)ELISA試劑盒英文名稱：Human anti-sperm antibody，AsAb ELISA Kit進(jìn)口/原裝

人抗酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)ELISA試劑盒英文名稱：Human tartrate-resistant acid phosphatase 5b，TRACP-5b ELISA Kit進(jìn)口/原裝小鼠尿微量白蛋白（ALB）ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物受體(PLAUR/uPAR)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠尿激酶型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA試劑盒      組裝/原裝

小鼠尿蛋白（UP）ELISA試劑盒      組裝/原裝